如何成为一名摄影师
如何成为一名摄影师
摄影师(photog,cameraman,photographer),泛指所有从事相机摄影工作的人。专业摄影师包括新闻记者、时装摄影师、广告摄影师、自然生态摄影师、建筑摄影师、婚纱摄影师,可以在影楼或户外工作。部份工作亦可由业余摄影师担任。此外,还有从事特级摄影、特殊摄影、团体艺术、字幕摄影等专业摄影师。
成为一名职业摄影师的道路并不平坦,有些人是从给著名摄影师当助手开始,有些摄影师从试验和错误中历练。一些报社、通讯社、体育新闻社、科普出版社都有固定的职位提供给摄影师,然而大部分摄影师可能都是自由职业者,也就是说,他们必须有持续的、众多的客户,广告公司、设计公司几乎都是与自由摄影师来签约的。
以下这些专业摄影师工作供你参考:
新闻摄影师、报道摄影师、肖像摄影师、体育摄影师、时尚摄影师、广告摄影师、野生动物摄影师,一些更具体的例如静物摄影师、电影静态摄影师、舞台摄影师、建筑摄影师、犯罪现场摄影师、医疗摄影师。
技能的全面性是未来摄影师的重要素质要求。即便是专业的摄影,摄影师也要应对不同的拍摄环境的拍摄,这就需要摄影师技术的全面性。一专多能是未来摄影师的基本要求。摄影培训也需要与时俱进在专业培训的同时培养学员的综合素质。
摄影是前沿时尚艺术的代表,在不断的发展变化之中。今天的技术风格很快就会被更新的技术所淘汰,每个摄影师都需要不断地学习提高才能够适应市场。所以紧随市场变化的提高培训是摄影职业培训的重要内容。
如何成为一名优秀的管理者
如何成为一名优秀的管理者
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坚定目标和方向。有不少的创业者会犯一个错误,什么错误呢?随风倒,今天市场上这个卖的比较好,就赶紧卖这个,明天看那个卖的好,赶紧卖那个,最终啊,哪阵风也赶不上,这就是目标不坚定,方向不明确,还有一些创业者呢,认为自己的资源优势非常的强大,有很多资源可以利用,但是就是不行动,不知道如何选择,最终错过很多的市场机会和机遇。
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强大的自我约束力。俗话说管人必先管自己,管理者是员工的榜样,你的自我约束力差,不执行公司的各种规章制度,员工的也会跟你一样,员工的眼睛始终都在你身上盯着,也许你的成绩他看不见,但是你的缺点,一定会被员工放大,所以一定要有强大的自我约束力。
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保持公平公正的处理方式。作为一名优秀的管理者,在处理员工事情时,一定是要有一个公平公正的心态,不能偏袒任何一方,有的管理者呢,会跟某些员工走得非常近,其他员工就会说,这个领导喜欢这个员工,会给他提供很多的机会,这样就会造成其他员工的误解,对待所有员工,一视同仁,处理问题公平公正,这样才能赢得员工的尊重。
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坚定的决心。无论是销售政策的执行,还是对员工问题的解决?一定要快刀斩乱麻,决定的事情就要去做,不能优柔寡断,不能让员工感觉到你没有魄力,容易失去员工对你的信任。
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计划周密。优秀的管理者,应该做好每一天的计划,每一周的计划,每月的计划,计划要做到滴水不漏,详实周密,并且严格按照计划去执行,不能朝令夕改,让员工无所适从。
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勤于奉献。作为一名管理者,无论是你的工作能力,还是你的工作量,一定要超过员工,不能说员工还没下班,都在加班,你作为一个管理者先跑回家了。
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凝聚团队精神。作为管理者,要能够观察员工的一举一动,各种细节,对待员工一定要细心,细致,通过解决员工的细节性问题,起到凝聚团队精神的作用。
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掌握详情。作为管理者,要对你所管理的岗位,做到了如指掌,如果你自己都不知道作为一个管理者应该去做什么,那么在执行过程中,员工肯定就没有信任感。
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仁爱之心。当员工遇到困难时,作为管理者一定要理解员工的处境,积极帮助员工去解决各种困难。 对待消费者也是一样。
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强烈的责任感。要敢于承担你所处职位的任何责任,不找借口,不做辩解,不能一出现问题就往员工身上推,要多找自身的原因,员工出现问题,首先就是管理者的责任。
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合作精神。管理者要能够合作所有的人,无论是你的员工,那你的上司,或者是消费者,只有合作才能产生力量,合作才能产生共赢。
12 果断。管理者在处理各项决策时,一定要快速果断,抓住各种市场机会和机遇,能够让员工尽快地去执行。
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善于沟通。优秀的管理者每天都要与员工进行沟通,掌握员工每天的工作情况,以及各个岗位的工作进展,及时发现问题解决问题。
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激励赞扬。要通过各种手段对员工进行激励,要养成赞扬员工的习惯,让员工感受到一种归属感,感受到公司对他的尊重,这样更能够激发员工的工作激情。
15 .敢于冒险。做一个优秀的管理者,要具有敢于冒险的精神,敢于让员工尝试各种新的营销技巧,营销手段,在不确定的市场环境下,要敢于做出决策。
16.创意思维。时刻培养创意性思维,把自己好的创意,想法,贯彻到市场营销活动中去,积极激发员工的创造性,在企业内部,营造创意氛围。
17.学习精神。管理者要不停的学习,充实自己,不仅要向行业内人士学习先进的市场营销经验,同时呢,还要向我们的员工学习市场一线解决问题的技巧和方法,还要向消费者学习,了解消费者的消费心理和习惯, 从而做出正确的市场策略。
18.求才若渴。作为管理者,要时刻注意吸纳优秀的人才加盟,通过各种优秀人才,解决自己在市场营销中,在企业管理中出现的短板,使企业能够健康有序地向前发展。
19.知人善任。管理者对员工要有一个详细的了解和认识,了解每个员工的优势劣势,合理地安排在各个岗位上,不仅仅做到一个萝卜一个坑,更要做到每一个坑和这个萝卜都是相匹配的。
如何成为一名合格的员工
如何成为一名合格的员工
第一、对工作要认真、负责,有事业心和责任感,这是成为一名合格员工的首要条件。对于自己的本职工作一定要力求完美,尽职尽责,不能马马虎虎,应付了事。
第二、要有强烈的上进心。一个人仅仅满足于把自己分内的事情做好还是不够的,应该有更高的追求和更远大的理想。人们喜欢、欣赏那种不断学习、上进的人,而不会欣赏没有追求的人。如果一个人没有上进心,不思进取,在竞争中就会处于劣势,最终被淘汰。
第三、积极参加本职以外的活动。在做好本职工作的基础上,要积极参加包括公益劳动、文艺活动、志愿服务,为贫困地区捐款等。这些活动不仅体现一个人的思想素养和对生活的态度,也给周围的其他人带来愉快和欢乐,赢得其他员工的好感和欣赏。
第四、不能做不受欢迎的人。实践证明这样五种人不受用人单位欢迎:傲慢的人、缺乏自信的人、感情用事的人、教条的人、虚伪的人。如果你身上或多或少地有这些毛病,就要努力改变它。
第五、正确处理自己与其他员工的关系。在工作上,尽力不要因为自己的利益得失而同其他同事斤斤计较;不要随便议论别人;与同事一起合作时,遇到观点不同时,应当面提出建议性的意见,尽可能不否定对方;与同事友好相处,但不能搞小团体。
第六、正确处理与上司的关系。处理与上司的关系很微妙,因为你的“生杀大权”就掌握在他们的手中,所以跟他们相处你要学会不卑不亢。所谓“不卑不亢”就是对上司不能一味的逢迎,要勇于坚持自己的见解,但不固执。不要像一团软面一样任人蹂躏,当自己的利益受到伤害时,要敢于说不。在他人眼里,你应该是个有思想、有见解、善解人意的人。
红糖祛斑吗?红糖祛斑真的有效果吗?
红糖祛斑吗?红糖祛斑真的有效果吗?
有效的,红糖可以去除斑点,斑点是由阳光照射引起的。普通人暴露在阳光下导致的黑色素沉积,这些黑色素会随着人体新陈代谢而排出。然而,有些人可能新陈代谢较慢或年龄较大,留下黑色素,因为红糖含有氨基酸、赖氨酸、苹果酸、柠檬酸等,这是合成人类蛋白质和支持新陈代谢的基本物质,所以有效。我们可以利用红糖来自制成面膜来敷脸,这样脸上的斑点会变少。
橙皮素溶于DMSO么
橙皮素溶于DMSO么
橙皮素(3’,5,7-三羟基-4-甲氧基黄酮,3’,5,7-trihydroxy-4’-methoxyflavanone)常见于柑橘类果实中。流行病学研究表明,每日增加橙皮素的摄入量能够减少人类心血管疾病的死亡率,肺癌和哮喘。也有研究显示,橙皮素能够有效治疗许多疾病,其能够产生广泛的生物效应,包括血管舒张作用、抗氧化剂作用、神经保护作用、消炎作用、抗病毒效果和降低胆固醇的作用(wangh,wangh,zhangh,etal.inhibitoryeffectsofhesperetinonnav1.5channelsstablyexpressedinhek293cellsandonthevoltage-gatedcardiacsodiumcurrentinhumanatrialmyocytes[j].actapharmacologicasinica,2016,789:98-108.)。橙皮素的结构式如下面的式i所示。
橙皮素的配糖形式是橙皮苷。橙皮苷具有多种生物功能,如清除自由基、抗氧化作用和保护神经,还潜在地预防老年痴呆症、抗抑郁症、抗炎、预防癌症和心血管疾病(a.hirata,y.murakami,m.shoji,y.kadoma,s.fujisawa,kineticsofradical-scavengingactivityofhesperetinandhesperidinandtheirinhibitoryactivityoncox-2expression,anticancerres.25(2005)3367-3374.)。
α-葡萄糖苷酶(ec3.2.1.20)是一种分解代谢酶,能够将淀粉及糖原水解成葡萄糖。在人体中,α-葡萄糖苷酶调节血糖水平,提供维持健康状态的能量。但是,对于患有ii型糖尿病的病人而言,α-葡萄糖苷酶活性高时,水解糖原能力强,提升了血浆中的葡萄糖水平,从而加重了ii型糖尿病,甚至会引起临床上的严重后果。
因此,出于药用目的抑制α-葡萄糖苷酶,已经有多种α-葡萄糖苷酶抑制剂进入临床应用,例如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。α-葡糖苷酶抑制剂通过维持体内血糖在一个稳定的水平,预防或治疗糖尿病。已有的α-葡糖苷酶抑制剂(包括阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇)是一类具有糖结构的新型抗糖尿病药物,可以明显降低ii型糖尿病人餐后血糖水平,减少糖尿病并发症的发生(何素婷,陈代杰.具有α-葡糖苷酶抑制作用的抗糖尿病药物[j].工业微生物,2003,33(1):43-49.)。
此外,也有文献提出α-葡萄糖苷酶是一种附睾标志物(epididymalmarker),与肿瘤的转移和增长过程相关(j.f.guerin,h.b.ali,j.rollet,c.souchier,j.c.czyba,alpha-glucosidaseasaspecificepididymalenzymemarker.itsvalidityfortheetiologicdiagnosisofazoospermia,j.androl.7(1986)156-162;s.atsumi,c.nosaka,y.ochi,h.iinuma,k.umezawa,inhibitionofexperimentalmetastasisbyanalpha-glucosidaseinhibitor,1,6-epi-cyclophellitol,cancerres.53(1993)4896-4899;r.pili,j.chang,r.a.partis,r.a.mueller,f.j.chrest,a.passaniti,thealpha-glucosidaseiinhibitorcastanosperminealtersendothelialcellglycosylation,preventsangiogenesis,andinhibitstumrowth,cancerres.55(1995)2920-2926.)。
目前,尚需要开发新的α-葡萄糖苷酶抑制剂。
技术实现要素:
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动,惊奇地发现,橙皮素能够有效地抑制α-葡糖苷酶,具有制备糖尿病特别是ii型糖尿病的药物的潜力。由此提供了下述发明:
本发明的一个方面涉及橙皮素或其药学上可接受的盐或者橙皮苷或其药学上可接受的盐在制备如下的(1)-(3)中任一项中的用途:
(1)α-葡糖苷酶抑制剂,
(2)治疗和/或预防糖尿病的药物,
(3)治疗和/或预防肿瘤的药物例如抑制肿瘤转移和/或增长的药物。
在本发明的一个实施方案中,所述的用途,其中,所述糖尿病为ii型糖尿病。
在发明中,通过抑制动力学和分子动力学模拟积分法评价橙皮素对α-葡萄糖苷酶的影响。本发明人发现,橙皮素能够可逆地抑制α-葡萄糖苷酶,且抑制类型为斜率-抛物线混合类型(ic50=0.38±0.05mm;kislope=0.23±0.01mm);另外,这种抑制是伴随蛋白质三级结构变化的。基于橙皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,其能够用于制备防治糖尿病特别是ii型糖尿病(例如与α-葡萄糖苷酶相关的ii型糖尿病)的药物。
肿瘤细胞中具有α-葡萄糖苷酶,α-葡萄糖苷酶参与到肿瘤细胞相互作用的转移过程以及肿瘤细胞表面某些寡糖的合成。在本发明的一个实施方案中,所述肿瘤转移和/或增长为α-葡萄糖苷酶参与的肿瘤转移和/或增长。
本发明的再一方面涉及一种药物组合物,其包含有效量的橙皮素或其药学上可接受的盐,和/或橙皮苷或其药学上可接受的盐;可选地,其还包含一种或多种药学上可接受的辅料(例如载体或赋形剂)。
在本发明的一个实施方案中,所述的药物组合物,其还包含选自如下的一种或多种:
阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇、二甲双胍、促胰岛素分泌剂、胰岛素增敏剂、gpl-1受体激动剂、ddp-4酶抑制剂。
在本发明的一个实施方案中,所述的药物组合物,其为口服制剂或注射剂。
通常本发明药物组合物含有0.1重量%-90重量%的橙皮素或橙皮苷和/或其药学上可接受的盐。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时,如果需要,可将橙皮素或橙皮苷和/或其药学上可接受的盐与一种或多种固体或液体药物赋形剂结合,制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明的橙皮素或橙皮苷或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药,给药途径可为肠道或非肠道,如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润剂与粘合剂,如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂,例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂,例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等;吸收促进剂,例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂,例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片,例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片、双层片或多层片。为了将给药单元制成丸剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等;崩解剂,如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊,将有效成分橙皮素或橙皮苷或其药学上可接受的盐与上述的各种载体混合,并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分橙皮素或橙皮苷或其药学上可接受的盐制成微囊剂,混悬于水性介质中形成混悬剂,亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂,如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂,可以使用本领域常用的所有稀释剂,例如,水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外,为了制备等渗注射液,可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油,此外,还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、ph调节剂等。
此外,如需要,也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明橙皮素或橙皮苷,或其药学上可接受的盐的给药剂量取决于许多因素,例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度,患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应,所用的具体化合物,给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个,例如二、三或四个剂量形式给药。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平,以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是,本领域的做法是,化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。
本发明在再一方面涉及一种药物产品,其包含独立包装的药物制剂1和药物制剂2,其中:
所述药物制剂1包含有效量的橙皮素或其药学上可接受的盐,和/或橙皮苷或其药学上可接受的盐;
所述药物制剂2包含选自如下的一种或多种:
阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇、二甲双胍、促胰岛素分泌剂、胰岛素增敏剂、gpl-1受体激动剂、ddp-4酶抑制剂。
在本发明的一个实施方案中,所述的药物产品,其中,所述药物制剂1或药物制剂2独立地为口服制剂或注射剂。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外抑制α-葡糖苷酶的方法,包括施加于对象有效量的橙皮素或其药学上可接受的盐,和/或橙皮苷或其药学上可接受的盐的步骤;优选地,所述对象为细胞;更优选地,所述细胞为哺乳动物细胞或者微生物细胞。
在本发明的一个实施方案中,所述的抑制方法,是非治疗目的的。
在本发明的一个实施方案中,所述的抑制方法,其中,所述哺乳动物细胞为人的体细胞例如人胰岛细胞。
在本发明的一个实施方案中,所述的抑制方法,其中,所述微生物细胞为细菌细胞、霉菌细胞或酵母菌细胞;优选地,为酿酒酵母细胞。
本发明的再一方面涉及一种治疗和/或预防和/或辅助治疗糖尿病的方法,包括给予受试者有效量的橙皮素或其药学上可接受的盐和/或橙皮苷或其药学上可接受的盐、本发明的药物组合物或者本发明的药物产品的步骤。
当用于上述治疗和/或预防和/或辅助治疗时,治疗和/或预防有效量的橙皮素或橙皮苷或其药学上可接受的盐可以以纯形式应用,或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者,以含有该活性成分与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。并且应认识到,本发明活性成分和药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者,具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定,所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度;所采用的具体化合物的活性;所采用的具体药物组合物;患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食;所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率;治疗持续时间;与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物;及医疗领域公知的类似因素。例如,本领域的做法是,给药剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。一般说来,橙皮素或橙皮苷或其药学上可接受的盐用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001-1000mg/kg体重/天,例如介于0.01-100mg/kg体重/天,例如介于0.01-10mg/kg体重/天。
本发明中,
术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态,该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。
术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明药物组合物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的动物,特别是哺乳动物,例如人、狗、猴、牛、马等。
发明的有益效果
橙皮素或其药学上可接受的盐能够有效地抑制α-葡糖苷酶,具有制备糖尿病特别是ii型糖尿病的药物的潜力。
附图说明
图1a:底物体系含橙皮素的条件下,对α-葡萄糖苷酶的抑制曲线。n=4。其中,横坐标表示橙皮素的浓度(mm),纵坐标表示α-葡萄糖苷酶的相对活性。
图1b:底物体系不含橙皮素的条件下,对α-葡萄糖苷酶的抑制曲线。n=4。其中,横坐标表示橙皮素的浓度(mm),纵坐标表示α-葡萄糖苷酶的相对活性。
图2:橙皮素对α-葡萄糖苷酶的可逆抑制曲线。其中,横坐标表示酶浓度[e],纵坐标是吸光度的值。橙皮素浓度分别为0mm、0.2mm、0.5mm、1.0mm和2.0mm,在图中依次用:■、●、▲、和◆代表。■所标记的曲线作为对照曲线。
图3:橙皮素对α-葡萄糖苷酶抑制作用的时间进程动力学曲线。其中,橙皮素浓度分别为0.05mm、0.2mm、0.3mm、0.5mm和0.8mm,在图中依次用:■、●、▲、和◆代表。其中,横坐标表示时间(min),纵坐标表示α-葡萄糖苷酶的相对活性。
图4a:橙皮素抑制α-葡萄糖苷酶的双倒数曲线图。其中,横坐标是底物浓度的倒数,单位是mm-1,纵坐标是吸光度的值的倒数。橙皮素浓度分别为0mm、0.1mm、0.2mm、0.3mm和0.4mm,在图中依次用:■、●、▲、和◆代表。
图4b:斜率对橙皮素浓度的二次做图,数据来自图4a。其中,横坐标表示橙皮素的浓度(mm),纵坐标表示不同浓度的橙皮素的双倒数曲线的斜率。
图5a:橙皮素影响下的α-葡萄糖苷酶的荧光分光光度测量图。横坐标是荧光分光光度计的发射波长,单位是nm,纵坐标是α-葡萄糖苷酶吸收的荧光强度。其中1-7分别依次代表橙皮素浓度0mm、0.02mm、0.03mm、0.04mm、0.05mm、0.1mm和0.15mm。
图5b:α-葡萄糖苷酶吸收的荧光强度最高峰值对应波长与橙皮素浓度二次做图。横坐标是橙皮素浓度,单位是mm,纵坐标是α-葡萄糖苷酶吸收的荧光强度最高峰值对应的荧光分光光度计的发射波长,单位是nm。数据来自图5a。
图5c:最大荧光强度与橙皮素浓度的曲线图。横坐标是橙皮素浓度,单位是mm,纵坐标是橙皮素影响下的α-葡萄糖苷酶最大荧光吸收强度。
图5d:最大荧光强度差与橙皮素浓度的二次做图。横坐标是橙皮素浓度的倒数,单位是mm-1,纵坐标是消去最大自然荧光强度影响的α-葡萄糖苷酶荧光吸收强度。
图6:ans荧光强度与橙皮素浓度的柱形图。横坐标是橙皮素浓度,单位是mm,纵坐标是ans荧光吸收强度。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
1.实施例所用试剂
本发明中,橙皮素、α-葡萄糖苷酶、pnpg、ans均购自sigma-aldrich(usa)公司。其余试剂为国产分析纯。
α-葡萄糖苷酶(来自酿酒酵母)酵母菌的α-葡萄糖苷酶和人体中的是类似的。其底物是糖原,产物是葡萄糖,已被证实(岳振峰,陈小霞,彭志英.α-葡萄糖苷酶研究现状及进展[j].食品与发酵工业,2000,26(3):63-67.)。
pnpg,4-硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷,其结构式如下面的式ii所示。
有研究证实,α-葡萄糖苷酶是属于键专一性酶,主要是作用于化学键,对底物配对的要求相对宽松(岳振峰,陈小霞,彭志英等.α-葡萄糖苷酶研究现状及进展[j].食品与发酵工业,2000,26(3):63-67,98.)。pnpg是本领域人员熟知的研究α-葡萄糖苷酶应该使用的底物。
ans,即8-苯氨基-1-萘磺酸,其结构式如下面的式iii所示。
2.部分溶液的配制
(1)α-葡萄糖苷酶溶液:α-葡萄糖苷酶溶于50mm的磷酸缓冲液,ph7.0。α-葡萄糖苷酶配制时浓度为10μm。用于下面的实施例。如果没有特别说明,反应体系中α-葡萄糖苷酶的反应初始浓度均为0.1μm。
(2)pnpg溶液:溶于50mm磷酸缓冲液,ph7.0,pnpg浓度为5mm。pnpg在反应体系中的浓度是2mm。
(3)橙皮素溶液:用100%dmso完全溶解橙皮素,再用50mm磷酸缓冲液,稀释至橙皮素浓度为100mm,此时dmso为5%。此橙皮素溶液为母液,使用时按照需求浓度进行稀释,稀释液使用5%dmso。这里5%dmso由5体积的dmso与95体积的去离子水配制得到。
实施例1:橙皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
下面在底物体系含橙皮素和不含橙皮素两种条件下,分别进行实验操作。
一、底物体系含橙皮素
1.实验方法
(1)α-葡萄糖苷酶溶液分别与不同浓度的橙皮素溶液以20∶1的体积比混合,混合后橙皮素的浓度依次为0mm、0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、0.8mm、1.0mm、1.5mm、2.0mm、2.5mm,在25℃下水浴10min,得到11份混合物。
(2)上述混合物每份分别取10μl,加入到1ml底物体系中,其中底物体系由pnpg溶液与相应浓度的橙皮素溶液以95∶5的体积比配制得到。这里加入橙皮素的目的是为了确保加入到底物体系之后,橙皮素的浓度与加入之前保持一致。底物pnpg的反应初始浓度均为2.0mm,α-葡萄糖苷酶的反应初始浓度均为0.1μm。
(3)使用紫外分光光度计,在发射波长400nm/min条件下,测量α-葡萄糖苷酶的活性变化,测定温度为25℃。
反应的整个过程从酶促反应动力学角度看包括3个阶段:一级反应、混合级反应和零级反应。需要在一级反应反应阶段进行测量,故操作时要迅速,滴加混合物后即开始测量,经过约1分钟后,从仪器显示的酶活性曲线上可看出过渡为混合及级应,则停止测量。
上述操作,对于每个橙皮素浓度,平行进行4次实验(n=4),取平均值。
2.实验结果
结果如图1a所示。
结果表明,橙皮素在酶活性剩余一半时的浓度(ic50)为0.38±0.05mm(n=4)。
二、底物体系不含橙皮素(稀释效应实验)
1.实验方法
按照前面“底物体系含橙皮素”的实验方法进行,不同之处在于底物体系含pnpg,不含橙皮素。
每个橙皮素浓度,平行进行4次实验(n=4)。
2.实验结果
结果见图1b。
由于底物体系没有橙皮素,酶体系加入到底物体系中测活时,橙皮素就被稀释了。图1b显示,通过稀释,酶活性能够恢复一部分,没有完全失活。说明橙皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用是可逆的。
图1b还显示,甚至在完全灭活的情况下,即橙皮素浓度为2.5mm时(如图1a,纵坐标都降到约0了),酶的活性能够恢复至70%。这表明橙皮素与酶是可逆结合的,酶的活性可通过简单的稀释效应恢复。
实施例2:抑制可逆性的验证实验
为了检测和验证橙皮素作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的可逆性,进一步证明实施例1的实验结果,在改变橙皮素浓度的条件下,做出酶残余活性与酶浓度的关系。
1.实验方法
(1)α-葡萄糖苷酶溶液分别与不同浓度的橙皮素溶液(橙皮素浓度:0mm、0.2mm、0.5mm、1.0mm和2.0mm)以20∶1的体积比混合,25℃下水浴10min,得到5份混合物。
(2)将上述混合物分别取10μl加入到1ml底物体系中,其中底物体系由pnpg溶液与相应浓度的橙皮素溶液以95∶5的体积比配制得到。底物pnpg的反应初始浓度为2.0mm,[e]表示α-葡萄糖苷酶的反应初始浓度,依次为0.02μm、0.05μm、0.1μm、0.15μm、0.20μm。
(3)用紫外分光光度计测量在发射波长400nm/min条件下,α-葡萄糖苷酶的活性变化,测定温度为25℃。具体操作参照实施例1。
上述操作,对于每个橙皮素浓度,平行进行4次实验(n=4)。
2.实验结果
结果如图2所示。
结果表明,随着抑制剂橙皮素浓度的升高,直线穿过原点,直线的斜率逐渐降低,说明橙皮素诱导抑制的作用是可逆的。如果是不可逆的情况,抑制剂浓度增加的曲线会与对照曲线(即图2中■所标记的曲线)斜率相同,并会与x轴相交于相对应酶浓度的位置。
图2的结果明确地证明,橙皮素与α-葡萄糖苷酶是可逆结合的。
实施例3:橙皮素对α-葡萄糖苷酶抑制作用的时间进程动力学
1.实验方法
(1)α-葡萄糖苷酶溶液分别与不同浓度的橙皮素溶液(0mm、1mm、4mm、6mm、10mm、16mm)以20∶1的体积比混合,得到6份混合物,在25℃下水浴,指定的时间间隔:1、2、3、4、5、10、15、20、25、30min,将上述混合物分别取10μl,加入到相对应橙皮素浓度的底物体系(1ml)中,其中底物体系由pnpg溶液与相应浓度的橙皮素溶液以95∶5的体积比配制得到。底物pnpg的反应初始浓度为2.0mm,α-葡萄糖苷酶的反应初始浓度为0.1μm。
(2)用紫外分光光度计在发射波长400nm/min条件下,测量α-葡萄糖苷酶的活性变化,测定温度为25℃。具体操作参照实施例1。
2.实验结果
如图3所示。
图3显示,在橙皮素(浓度在0.05-0.8mm)与酶混合水浴的时间间隔内,酶没有显著的动力学进程。酶失活的反应在很短的时间内就到达了平衡,这证明了橙皮素能够非常迅速地与酶结合,并没有经过特殊的过程就使催化活动失活,同时说明了α-葡萄糖苷酶上有橙皮素特定的结合位点。换言之,快速失活而没有任何明显的渐进的动态过程表明的具体对接橙皮素的位置可能位于酶活性部位的口袋里。
毛肚涮几秒合适呢
毛肚涮15秒左右合适。
其实所谓的七上八下并不是什么涮毛肚的新姿势,只是说捞出来七秒,放下去八秒,所以加起来就是15秒。因此想要吃到嫩脆的毛肚,涮15秒左右就可以吃了,这时的毛肚不会老,口感脆、嫩、鲜,十分美味。
教你火锅涮毛肚的新吃法
1、筷子夹着涮毛肚非常的薄非常的嫩,所以不能直接放入锅底涮,否则等涮好再从锅底中寻找捞出的时候,毛肚已经烫老不能吃了。所以应该用筷子夹住毛肚的一头,然后用大家都知道的七上八下,大约15秒左右来涮毛肚,这样涮的毛肚会非常的爽口好吃。
2、大片毛肚涮很多人都以为毛肚切的小小的比较容易烫熟,吃起来也比较嫩,其实这是一个误区。想要吃到新鲜嫩脆的毛肚,那么在毛肚的切片上一定要大片的毛肚去涮。因为整片毛肚放入锅中涮的时候,锅中的高温可以迅速的把整片毛肚都烫熟,散热也比较均匀,这样毛肚就不容易烫老。如果是很小的一块,温度过高一不小心就会把毛肚烫的太老难以下咽了。所以烫大片的毛肚才是正确的吃法。
3、漏勺涮毛肚把新鲜的生毛肚放入到火锅专用的漏勺里面,然后放入火锅汤底中涮上0来秒钟。边烫边用筷子把毛肚翻面,这样毛肚受热均匀,才会又嫩又脆。
怎么知道一条蛇的年龄
怎么知道一条蛇的年龄
看蛇皮的颜色就会判断蛇的年龄,也可以看蛇身上的纹路,因为蛇身上每年都会长一个圆环,如同植物一样。
蛇是脊索动物门、爬行纲下的一类动物,体细长,眼球外有保护性的透明皮肤,瞳孔圆形、垂直椭圆形或水平椭圆形,无活动性眼睑,晶体几乎呈圆球形,舌细长分叉,前颌骨、上颌骨、腭骨、翼骨和齿骨上附生着齿尖后弯的牙齿,然而齿的大小、数目及其结构则随不同蛇种而异。
蛇的寿命
不同蛇类寿命各不相同,主要与其种类和生活条件相关,一般情况下,小型蛇类的寿命在2到5年左右,中型蛇类在5到12年左右,而大型蛇类可达10到20年左右,蟒蛇可活到30到40年左右甚至更久,毒蛇的生长发育慢于无毒蛇,因此除蟒蛇外绝大部分毒蛇比无毒蛇的寿命更长。
后羿的徒弟叫什么名字?
后羿的徒弟叫什么名字?
后羿的徒弟叫逄蒙。
逄蒙是五帝帝尧时期一个善于射箭但品行不端的小人。相传,羿是被逄蒙用桃木做的大棒打死的。由于羿生前为人民除了害,因此他死后为“鬼雄”,做了统辖万鬼的宗布神。又由于羿死于桃木,因此历来的鬼怪们都怕桃木。
人物故事:
逄蒙生有异相,两只手都有六个手指。跟随自己的师父后羿学到本领之后,野心也日益膨胀,想要杀害后羿以提升自己的地位。所以他在趁后羿不在时,逼迫嫦娥将长生不老药服下,嫦娥这样才飞到了月亮之上。
后来,逄蒙就向后羿献计,让后羿将月亮射下,这样一来就可以与嫦娥见面了。后羿将信将疑,因为曾经有人对他说:“后羿落日,嫦娥追月,锋芒尽露,魂断落日”,后羿担心射月会遭遇不测,迟迟不敢前往。于是逄蒙就答应后羿自己来替他将月亮射下。
后羿终于下定了决心,师徒二人来到昆仑山,由逄蒙来射月。只不过这一次逄蒙没有将弓箭对准月亮,而是对准了后羿,后羿醒悟过来时为时已晚,就这样被自己的徒弟逄蒙所射死了。相传在这之后,逄蒙摆脱了后羿的制约,自己的势力也逐渐发展壮大,在商朝时期建立了自己的国家——逄国。
幌伞枫叶子上卷是什么原因
幌伞枫叶子上卷是什么原因
幌伞枫叶子上卷是水浇太多导致根系腐烂叶子上卷。水少的现象则是叶子发黄。
目前的挽救办法是停止浇水,用细铁棒在盆土中戳出一些透气的孔洞,将其放在户外日照不太强烈之处养几天再观察,若能萌发新叶则有希望,否则就换一盆吧,浇水要掌握盆土表面的干湿度,把握不干不浇,浇则浇透的原则。
幌伞枫栽培技术
小苗移栽时,先挖好种植穴,在种植穴底部撒上一层有机肥料作为底肥,厚度约为4到6厘米,再覆上一层土并放入苗木,以把肥料与根系分开,避免烧根。
放入苗木后,回填土壤,把根系覆盖住,并用脚把土壤踩实,浇一次透水。湿度管理喜欢湿润或半燥的气候环境,要求生长环境的空气相对温度在百分之50到百分之70,空气相对湿度过低时下部叶片黄化、脱落,上部叶片无光泽。
扦插后的管理温度插穗生根的最适温度为20度到30度,扦插后遇到低温时,保温的措施主要是用薄膜把用来扦插的花盆或容器包起来,扦插后温度太高温时,降温的措施主要是给插穗遮荫,要遮去阳光的百分之50到百分之80。
同时要给插穗进行喷雾,每天3到5次,晴天温度较高喷的次数也较多,阴雨天温度较低温度较大,喷的次数则少或不喷。湿度扦插后必须保持空气的相对湿度在百分之75到百分之80。插穗生根的基本要求是,在插穗未生根之前,一定要保证插穗鲜嫩能进行光合作用以制造生根物质。
但没有生根的插穗是无法吸收足够的水分来维持其体内的水分平衡的,因此,必须通过喷雾来减少插穗的水分蒸发,在有遮荫的条件下,给插穗进行喷雾,每天3到5次,晴天温度越高喷的次数越多,阴雨天温度越低喷的次数则少或不喷。
扦插繁殖离不开阳光的照射,因为插穗还要继续进行光合作用制造养分和生根的物质来供给其生根的需要。但是,光照越强,则插穗体内的温度越高,插穗的蒸腾作用越旺盛,消耗的水分越多,不利于插穗的成活。
地植宜施腐熟垃圾或禽畜粪做基肥,种植以后一般可不再施肥。盆栽宜用森林表土或塘泥,干粪及钙镁磷等做基肥,以后视叶片生长情况,每年施加氮肥水数次。
牛回草是什么东西
牛回草是什么东西
牛回草的学名为牛反刍,是牛的正常消化活动,属于正常生理现象。
自然界中具有非常多牛的天敌,如老虎、石子、棕熊等大型肉食性动物,为了躲避天敌,牛在生长过程中逐渐进化出反刍的现象,先将食物大口吃进肚子,到了安全的地方在将食物反到口中进行再次咀嚼。
吃下去的草一般进入了牛的第一个胃,也叫瘤胃,瘤胃在牛体内相当于发酵罐,具有储存发酵饲料和初步消化饲料的作用。
保存在瘤胃中的饲料未经过咀嚼较为粗糙,饲料在瘤胃内会被胃内的消化液浸泡,而胃壁受到粗糙草料的刺激后,会进行收缩,从而使草料送回牛最终进行二轮咀嚼,再次混合牛的唾液后进入到瘤胃。
反刍能使牛吃进去的草料变软变细,更易于牛进行吸收营养,也能使牛更多的采食草料。
反刍不仅能够帮助牛进行进食消化,还能帮助牛进行排除瘤胃中产生的气体,但是气体主要通过嗳气排出,牛一小时内平均嗳气17-20次。
在反刍现象中能够看出牛是否健康,若牛停止反刍,进食的饲料会停留在牛的瘤胃里面,饲料在瘤胃里面进行发酵,气体无法排除,会导致牛的瘤胃膨胀。
牛回草的正常情况:
1、在正常情况下,牛在处于安静或者休息的状态时,每天会进行6-8次的反刍行为,每次持续的时间在20-40分钟左右,个别牛反刍时间一次长达1个小时。
2、每日牛用在反刍的时间在6-8个小时左右,一般在喂食后的半个小时到一个小时内开始反刍。
3、犊牛在出生21天后会开始出现反刍现象,牛犊一天反刍次数可达16次。